Удина И.Г.,* Калашников А.Е.* Малькова СА.,*******
Бородачев А.В.****, Кривцов Н.И.****
*Учреждение Российской Академии наук Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова, г. Москва
**ГУ НИИ Институт вирусологии им.Д.И. Ивановского РАМН, г. Москва
***Майкопский опорный пункт пчеловодства, г. Майкоп
****Государственное научное учреждение Научно-исследовательский институт пчеловодства

Медоносная пчела, как объект промышленного разведения, подвержена различным заболеваниям, многие из которых наносят значительный ущерб пчеловодству. Высокая концентрация семей пчел, массовые передвижения (кочевки) пасек, обмен племенной продукцией как внутри одной страны, так и в международном масштабе, трудности изолирования пчел на местности могут приводить к широкому распространению возбудителей различных болезней среди этих насекомых.
Одним из важных паразитарных заболеваний пчел является варрооз (варроатоз) — тяжело протекающее заболевание личинок, куколок и взрослых пчел. Источником заражения являются инвазированные семьи пчел. Клещ Varroa destructor, распространяется блуждающими пчелами, пчелами-воровками, трутнями, при подсиливании семей зараженным расплодом, с роями, при перевозках пасек, купле и продаже пчел и маток.
Следует отметить, что основное место сосредоточения клеща в активный период — печатный расплод и внутриульевые пчелы. При пчелином воровстве до 40 % паразитов способны к перемещению между ульями.
Преимущественно поражается трутневой расплод (в 75-15 раз чаще), чем рабочий, клещи фактически отсутствуют в маточниках.
В последние годы получили чрезвычайно широкое распространение вирусные инфекции пчел, в том числе, в связи с высоким уров¬нем заражения популяций пчел клещом V. destructor, который, как было установлено, является переносчиком вирусных инфекций пчел (Bowen-Walker P.L. et al, 1999).
Помимо таких распространенных механизмов передачи вируса, как горизонтальный — от пчелы к пчеле и вертикальный — от пче¬линой матки к потомству, передача вирусов клещами V. destructor служит дополнительным способом распространения вируса (Chen Y.P. et al., 2006).
Последствия заражения клещом V. destructor популяций пчел весьма драматичны.
Помимо вреда наносимого самим эктопаразитом, включая распространение вирусов, при клещевой инфекции у пчел отмечена иммунная супрессия — снижается уровень экспрессии генов, вырабатывающих основные антибактериальные и противовирусные белки (Yang X. and Cox-Foster D., 2005).
Таким образом, в настоящее время вирусные инфекции пчел представляют серьезную угрозу выживаемости пчел, особенно при зараженности пчел клещами V. destructor (Tencheva D. et al., 2004).
Первые же исследования с помощью современных диагностических методов на основе RT-PCR выявили чрезвычайно высокий уровень инфицированности — в отдельных семьях свыше 90%. В одной семье могут одновременно быть распространены до пяти-шести разных вирусов пчел (Bowen-Walker P.L. et al, 1999).
Выявлено, что наиболее часто распространены у пчел такие вирусы, как вирус острого паралича пчел (ABPV- acute bee paralysis virus), вирус черных маточников (BQCV — black queen cell virus), вирус хронического паралича (CBPV- chronic bee paralysis virus), кашмирский вирус пчел (KBV- Kashmir bee virus), вирус мешотчатого расплода (SBV — sacbrood virus), вирус деформации крыла (DWV — deformed wing virus), вирус израильского острого паралича (israel acute bee paralysis virus).
129В данной работе мы проанализировали больных пчел с пасеки Майкопского района республики Адыгея, Московской, Тульской областях и Абхазии на предмет присутствия шести широко распространенных вирусов пчел.
Нами проведен анализ присутствия шести наиболее распространенных РНК-содержащих вирусов пчел методом ОТ-ПЦР на пасеках и дополнительно анализ нуклеотидной последовательности вируса деформации крыла.
В результате исследований с помощью современных диагностических методов на основе ОТ-ПЦР в Майкопском районе впервые был обнаружен вирус деформации крыла (DWV — deformed wing virus), а дополнительно выявлены вирусы мешотчатого расплода (SBV -sacbrood virus) и черных маточников (BQCV — black queen cell virus). В некоторых семьях были обнаружены до трех разных вирусов. В изученных образцах пчел, которые были взяты из предположительно инфицированных ульев, наиболее частым был вирус деформации крыла, на втором месте по распространенности выявлен вирус мешотчатого расплода, наиболее редкий — вирус черных маточников. Три вируса — вирус острого паралича, вирус хронического паралича и кашмирский вирус не выявлены.
Так, в Майкопе было выявлено одновременно до трех вирусов (DWV, SBV и BQCV), в Московской же области наблюдалась инфицированность только двумя вирусами (DWV и SBV).
В работе мы использовали праймеры для ОТ-ПЦР, предложенные ранее для изучения зарубежных популяций пчел (Berenyi et al. 2006). Поэтому для надежности утверждения об отсутствии какого-то вируса в конкретной популяции пчел на территории России, вероятно, следует применять не менее двух пар праймеров для выявления одного вируса, либо использовать праймеры к консервативным участкам генома вируса.
Проведенный анализ нуклеотидной последовательности фрагмента VP2-VP1 вируса DWV (GenBank — GQ422786) (Удина И.Г. и др., 2010, Гришечкин А.Е. и др., 2010), изученной нами в Московской области методом молекулярной филогении, соответствует гипотезе об относительно недавней экспансии этого вируса в популяциях пчел в России.

Работа поддержана грантом РФФИ-офиц 08-04-13740-офиц.

Литература:

1. Bowen-Walker P.L., Martin SJ. and Gunn A. The transmission of deformed wing virus between honeybees (Apis mellifera L.) by ectoparasitic mite Varroa jacobsoni Oud // J. Invertebr. Pathol. — 1999. -Vol. 73. -P. 101-106.
2. Berenyi O., Bakonyi Т., Derakhshifar I., Koglberger H., and Nowotrry N. Occurrence of six honeybee viruses in diseased Austrian apiaries. //Applied and Environmental Microbiology. — 2006. — Vol. 72. -No 4.-P. 2414-2420.
3. Chen Y. P., Pettis J. S., Collins A., and Feldlaufer M. F. Prevalence and Transmission of Honeybee Viruses // Applied and environmental microbiology. — 2006. — Vol. 72. — N1. — P. 606-611.
4. Tencheva D., Gauthier L., Zappula N., Dainat В., Cousserans F., Collin M.E., and Bergoin M. Prevalence and seasonal variations of six bee viruses in Apis mellifera L. and Varroa destructor mite populations in France. //Applied and Environmental Microbiology. — 2004. — P. 7185-7191.
5. Yang X. and Cox-Foster D. L. Impact of an ectoparasite on the immunity and pathology of an invertebrate: Evidence for host immunosuppression and viral amplification. // Proc .Nat. Ac. Sci.. — 2005. — Vol. 102. -N 21. — P. 7470 — 7475.
6. Удина И.Г., Гришечкин А.Е., Калашников А.Е., Злобин В.И., Кривцов Н.И Идентификация вируса деформации крыла (DWV) у медоносной пчелы Apis mellifera L. в Московской области методом ОТ-ПЦР. // Вестник РАСХН. — 2010. — №1. — С. 69-73.
7. Гришечкин А.Е., Кунижева С.С., Учаева B.C., Калашников А.Е., Злобин В.И., Удина И.Г. Обнаружение вируса деформации крыла (DWV) у медоносной пчелы Apis mellifera L. на пасеках в Мо¬сковской области методом RT-PCR. // Вопросы вирусологии. — 2010. В печати.