Батуее Ю.М.,* Горячева И.М.**
*ГНУВНИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко
**Государственное учреждение Академии наук Институт общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН

На начальном этапе изучения вирусов пчел для их идентификации чаще всего использовали реакцию иммунодиффузии (РЯД). Недостатком РИД является ее низкая чувствительность. В настоящее время исследователи для изучения вирусов пчел стали активно использовать современный, высокочувствительный метод ГЩР (полимеразной цепной реакции), позволяющий обнаруживать вирусы в очень малых концентрациях, и выявлять различия между штаммами вирусов на молекулярно-генетическом уровне.
С помощью метода ПЦР американские исследователи установили, что пчелы практически всех семей, погибших в США от так называемого коллапса в 2006-2007 гг., были инфицированы израильским вирусом острого паралича. Было показано, что этот вирус имеет три разновидности, высказано предположение о том, что эти разновидности, подобно вирусу гриппа, способны к рекомбинации и изменению своей вирулентности.
Интенсивные вирусологические исследования пчел с помощью методов молекулярно-генетического анализа проводятся и во многих европейских странах, в том числе там, где отмечается гибель пчелиных семей с признаками коллапса. Однако европейские исследователи возможной причиной потерь пчелиных семей чаще всего считают вирус деформации крыла и обычный вирус острого паралича.
Израильскими исследователями было показано, что участки генома некоторых вирусов могут интегрироваться в геном пчел. Интеграция вируса в геном хозяина — медоносной пчелы — имеет большое биологическое значение. Сообщается о невосприимчивости к израильскому вирусу острого паралича организма пчел, в геном которых интегрирован участок генома этого вируса. Фрагменты генома израильского вируса острого паралича и, возможно, вируса деформации крыла, интегрированные в геном пчелы, могут быть стабилизированы, становятся наследственным признаком и передаются потомству. Пчела, которая никогда не контактировала непосредственно с вирусом, может быть диагностирована по результатам ПЦР как зараженная, тогда как она унаследовала вирусный сегмент от прародителя. Поэтому для исключения ложноположительных ответов необходимо проведение специальных исследований.
Нами было проведено исследование патологического материала (погибших пчел и личинок) с территории России с помощью метода ПЦР с обратной транскрипцией и сопоставление полученных данных с результатами реакции иммунодиффузии. Была проведена идентификация вирусов мешотчатого расплода, обычного острого паралича и деформации крыла. Для идентификации методом ПЦР вируса мешотчатого расплода были использованы личинки, погибшие от этого вируса (Московская область). Для идентификации вируса острого паралича использованы взрослые пчелы, зараженные этим вирусом в лабораторных условиях, а также две пробы погибших куколок из больных семей пчел, доставленные из Краснодарского края и Оренбургской области. Для идентификации вируса деформации крыла использованы взрослые пчелы (Московская область). Во всех случаях исследуемый патологический материал положительно реагировал на соответствующие вирусы в РИД.
Идентификация вирусов была проведена методом ПЦР с обратной транскрипцией по условиям, описанным ранее Tentcheva et al., 2004 (A); Berenyi et al., 2006 (Б). ПЦР-продукты специфического размера были получены для вируса мешотчатого расплода, всех образцов вируса острого паралича и вируса деформации крыла в случае, если реакция проводилась по условиям (А). Нам удалось получить ПЦР-продукт специфического размера только для вируса деформации крыла в том случае, если реакция проводилась по условиям (Б). Определение последовательности нуклеотидов изучаемой об¬ласти генома вируса деформации крыла и вируса острого паралича и анализ полученных последовательностей выявили гомологию исследуемых последовательностей с последовательностями этих вирусов, размещенными в международной базе данных. Полученные результаты однозначно подтверждают достоверность результатов молекулярно-генетического анализа. Отсутствие продуктов амплификации для образцов, содержащих вирус острого паралича в случае проведения реакции по условиям (Б) требует специального внимания. Хорошо известно, что для вирусов характерна вариабельность генома и вполне возможно, что отсутствие положительной реакции связано с распространением на территории России специфических штаммов вируса острого паралича пчел.
Таким образом, использование молекулярно-генетических методов анализа для выявления вирусов пчел, а тем более интерпретация результатов требует осторожности. Необходимо изучить штаммы вирусов, циркулирующие на территории России на молекулярно-генетическом уровне в сочетании с уже отработанными серологическими методами диагностики.
Молекулярно-генетические исследования дадут возможность оценить распространенность вирусов в популяциях пчел России, в том числе тех вирусов и их разновидностей, выявить которые ранее не представлялось возможным. Полученные данные заложат основу для понимания и прогнозирования развития ситуации в конкретном регионе в связи с наличием того или иного вируса или их комбинаций.